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Western Blot相关原理与技术操作

发布人:浩然生物 浏览 3833次【字号 】 发布时间:2010年09月28日 打印本页

【实验原理】: Western Blot 印迹方法,又称为免疫印记,是将获得的蛋白质样品通

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离,并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物(NC膜或PVDF 膜)上,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合,再与经辣根过氧化物酶标记(偶联)的二抗结合,最后用ECL超敏发光液试剂检测。如果转印膜上含有靶蛋白,经X 光片曝光、 显影后,则会在X-光片上出现特异性蛋白条带。

Western blot 实验分为三个部分:

1. 样品蛋白质的制备、 蛋白质含量测定 2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

3. 凝胶转膜及其检测

以提取细胞蛋白为例Western 印记杂交实验流程图:

提取细胞总蛋白、测定含量

制备SDS-PAGE

蛋白样品变性、电泳

电泳转膜

封闭

一抗

TBST 洗涤


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