原装现货|Ellman’s Reagent别名:5,5'-Dithio-bis-(2-nitrobenzoic Acid)说明:能灵敏的检测蛋白质、肽以及组织中游离的巯基产品描述: DTNB为Ellman试剂。它用于比色法测定生物样 品中巯基。它易溶于水。在巯基化合物的存在下,无色的DTNB将被转变成黄 色的5-巯基-2-硝基苯甲酸。由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有最大吸收,DTNB的吸收光谱并不干扰巯基的测定。 配置方法: 准确称取0.198gDTNB用50mMNa2HPO4(pH=7.0)配制成50ml溶液,存放于棕色瓶中,于暗处低温保存备用。应该注意的是配置缓冲、浓度,储存时要避免见光。 应用举例: 半胱氨酸中自由巯基的定量检测方法 一、试剂的配制: 1、Tris-HCL缓冲液(0.25M):DDW准确配制后,用盐酸调节pH=8.3; 2、半胱氨酸标准溶液(1mM):准确称取0.017563gL-半胱氨酸(175.63),用1ml甲酸溶解,以DDW定容至100ml; 3、DTNB(分子量:396.35)标准溶液(10mM):准确称取0.198175gDTNB用50mMNa2HPO4(pH=7.0)配制成50ml溶液,存放于棕色瓶中,于暗处低温保 存备用 4、DTNB分析溶液(0.1mM):由1体积10mMDTNB标准液加99体积0.25M的Tris缓冲液配制而成,现用现配。 二、标准曲线的制作; 1、25℃条件下,用Tris缓冲液稀释半胱氨酸标准液配成梯度的稀释液(5.0ml), 其浓度分别为:0.00mM、0.025mM、0.05mM、0.1mM、0.15mM、0.2mM; 2、取上述各浓度溶液1ml分别加入到5ml预先恒温于25℃水中的DTNB分析溶液,摇匀,准确静止10min,立即于波长412nm处测定吸光度值(A)。