QuantiTect Rev. Transcription Kit快速合成cDNA,用于两步法real-time RT-PCRcDNA合成和gDNA去除仅用20分钟完成有效去除基因组DNA,无需设计RNA特异性引物或探针高特异性,即便是低丰度的转录本也能获得高产量的cDNA转录本的5' 和3' 端区域都可以进行cDNA 合成 为获得准确的real-time RT-PCR基因表达分析结果,很重要的是仅扩增和检测cDNA。基因组DNA的干扰可通过设计横跨外显子/外显子边界的引物或探针避免。尽管如此,在某些特殊情况下(如:cDNA来自一个单外显子基因),起始RNA样品必须无基因组DNA。 使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,基因组DNA污染物可使用独特的gDNA去除缓冲液迅速有效的去除(见图:“高效去除基因组DNA,确保精确的Real-Time RT-PCR”)。因为纯化RNA样品后无需另外采用DNA酶消化,从而可节省时间和费用。并且也无需设计RNA特异性引物和探针。 低丰度转录本获得更高产量的cDNA 操作流程使用QuantiTect逆转录试剂盒可在20分钟内去除基因组DNA和合成cDNA(见流程图)。由于两个反应均在同一孵育温度并使用预混液构建反应,因此操作过程快速且方便。相反,供应商I提供的试剂盒操作需更多移液步骤且经常需要调整孵育温度,因此需要更长时间和更多手动操作。 应用QuantiTect Reverse Transcription Kit可从各种类型的起始样品中合成cDNA以实现高效和高灵敏度的real-time RT-PCR,包括激光显微切割样品和活组织切片样品。与其他供应商提供的试剂相比,QuantiTect Reverse Transcription Kit在检测低丰度基因时具有更高的灵敏度(见图:“Real-Time,两步法RT-PCR精确度更高”)。 为获得高特异性和高灵敏度的real-time RT-PCR结果,又避免耗时的反应步骤优化过程,我们推荐QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect产品联合使用。包括经优化的PCR反应预混液和即用型引物,使用SYBR Green染料法或序列特异性探针法进行 real-time RT-PCR。