QIAGEN Plasmid Giga Kit 纯化最高产量可达10 mg的转染级别纯度的质粒或科斯质粒DNA纯度相当于2倍氯化铯梯度离心高重现性的产量和转染级别纯度经济实惠使用LyseBlue,获得最佳的裂解和最大的DNA产量QIAGEN Plasmid Kits应用重力流阴离子交换柱纯化转染级纯质粒DNA。该试剂盒可制备多至20 μg (Mini)、100 μg (Midi)、500 μg (Maxi)、2.5 mg (Mega)或10 mg (Giga)的质粒DNA。离心法进行裂解液澄清和异丙醇沉淀。 传统的QIAGEN Plasmid Giga Kits应用重力流阴离子交换柱QIAGEN-tip 10000 高效纯化质粒DNA,也单独提供QIAGEN-tips 10000。 QIAGEN Plasmid Giga Kit 特性 预期产量* 柱子容量 培养体积† Up to 10 mg 10 mg 2.5 - 5 liters 实际产量取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌、培养基和培养体积。培养体积取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌和培养基。 原理QIAGEN 独特的阴离子交换柱专用于核酸纯化,其卓越的抽提性能可确保DNA纯度相当于甚至高于两次CsCl梯度离心的产物(见图"QIAGEN Plasmid kits制备超纯的质粒DNA)。预装的QIAGEN柱子(见图“QIAGEN Plasmid Kit Anion-Exchange Tips”) 以重力流方式纯化,不会流干,将质粒制备所需的手工操作时间降至最少。整个质粒纯化系统避免了苯酚、氯仿、ethidium bromide和CsCl等有毒物质,将对用户和环境的危害降至最低。 操作步骤应用QIAGEN Plasmid Kits纯化过程中,通过离心取出细菌裂解液。然后将澄清的裂解液装入阴离子交换柱,在适当的低盐浓度和pH值条件下,阴离子交换柱会选择性地结合质粒DNA。RNA、蛋白质、代谢物和其他小分子杂质通过中盐浓度洗涤去除,应用高盐浓度缓冲夜洗脱超纯的质粒DNA(见流程图“Comparison of QIAGEN Plasmid Kit Procedures”)。通过异丙醇沉淀浓缩并脱盐DNA,离心法收集DNA。 应用QIAGEN Plasmid Kits 纯化所得的质粒DNA非常适合于诸如转染(见图"转染效率 Vs. 质粒纯化方法")、克隆、手动或自动测序(包括毛细管测序)和体外转录等应用。