LightShift (R) Chemiluminescent EMSA Kit/LightShift 化学发光EMSA试剂盒识别调控序列,确定蛋白-DNA结合区域及亲和力。产品特点:含有EBNA对照体系,可以帮助初次使用者进行实验,并理解用于确定特异结合相互作用的方法。极好地用于检测核提取物中的低丰度蛋白。灵敏度优于放射性检测和地高辛检测方法。与以往建立的通用的用于检测DNA-蛋白相互作用的结合条件相互兼容。Thermo Scientific Light-Shift化学发光EMSA试剂盒是一种非常强劲且灵敏的检测系统,通过进行电泳迁移率实验(EMSA)鉴定蛋白质-DNA结合相互作用。这个试剂盒包括用于建立和定制蛋白-DNA结合反应的试剂,用于检测试剂盒体系的一组对照DNA提取物和蛋白提取物,作为探针去识别生物素标记靶DNA的稳定辣根过氧化物酶标记的链亲和素,以及非常灵敏的用于检测的化学发光底物。 整个实验中要求实验者准备的是已纯化的末端生物素标记的靶DNA,需要检测的蛋白提取物,尼龙膜和基本的电泳设备。靶DNA可以通过直接合成产生带有生物素标记的5’或3’末端,或者可以在合成之后使用Thermo Scientific 生物素DNA3´末端标记试剂盒(见下页产品目录号89818)标记上生物素。可通过不同方法获得核、胞质或全细胞蛋白提取物,包括Thermo Scientific NE-PER 核蛋白和胞质蛋白提取试剂盒(产品目录号78833)LightShift* EMSA检测的原理与Western blot类似。生物素末端标记的双链DNA与核提取物或者纯化的因子共同孵育,之后进行非变性胶电泳。然后将DNA快速(30分钟)转到正极(带正电)的尼龙膜上,紫外交联,使用HRP标记的链亲和素进行孵育,再与底物孵育。从标记到获得结果的整个实验流程可以在一天内完成 货号 产品介绍 包装 20148 LightShift 化学发光EMSA试剂盒 足够用于100个结合反应和检测800cm2膜的试剂 包括:10×结合缓冲液 生物素-EBNA对照DNA 未标记的ENBA DNA ENBA提取物 Poly(dI•dC) 50%甘油 1%NP-40 1M 氯化钾 100mM氯化镁 200mM EDTA,pH8.0 5×上样缓冲液 稳定的辣根过氧化物酶标记的链亲和素 鲁米诺/增强溶液 稳定的过氧化物溶液 封闭缓冲液 4×洗涤缓冲液 底物平衡缓冲液 试剂盒 1ml 50μl 50μl 125μl 125μl 500μl 500μl 1ml 500μl 500μl 1ml 1.5ml 80ml 80ml 500ml 500ml 500ml