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特点
全长的第一链cDNA 产量高，最长可合成13 kb的cDNA。
增加的反应温度范围：42-55°C。
配套提供RiboLock™ RNase Inhibitor。
完全 一 试剂盒提供oligo(dT)18和随机六聚体引物。
应用
第一链cDNA合成，作为RT-PCR和实时RT-PCR模板(1, 2)。
构建全长cDNA文库。
制备杂交用探针。
aRNA合成。
说明
RevertAid™ H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit 是一个完整的以RNA为模板高效合成第一链cDNA的反应体系。该试剂盒可合成长达13 kb的cDNA。
试剂盒使用RevertAid™ H MinReverse Transcriptase。该酶由于点突变而完全消除了RNase H活性。
因此，该酶不能降解第一链cDNA合成时形成的RNA-DNA复合体中的RNA。该酶在宽温度范围(42-55°C)保持活性，适合逆转录具有大量二级结构的RNA。试剂盒配套提供的重组RiboLock™ RNase Inhibitor 有效保护RNA模板免于降解。该产品与逆转录反应完全兼容，因为在55°C时仍然保持活性。
试剂盒配套提供oligo(dT)18和随机六聚体引物。oligo(dT)18与mRNA 的poly(A)尾选择性结合。随机六聚体引物转录无需poly(A) 尾，因此可转录mRNA的5’-端区域，也可以无poly(A)尾的RNA (micro RNAs)为模板合成cDNA。试剂盒也可使用基因特异性引物。
第一链cDNA可直接作为PCR (见RT-PCR操作说明书)、实时PCR或第二链cDNA合成(见操作说明书)的模板。
质量控制
功能测试：以多聚腺苷酸RNA转录子为模板合成第一链cDNA(分别测试特异性引物、oligo(dT)18和随机六聚体引物)。合成的cDNA作为后续PCR的模板。
组分
•RevertAid™ H Minus Reverse Transcriptase
•RiboLock™ RNase Inhibitor
•5X Reaction Buffer
•dNTP Mix, 10 mM each
•Oligo(dT)18 Primer
•Random Hexamer Primer
•Control GAPDH RNA
•Forward GAPDH Primer, 10 µM (5'-CAAGGTCATCCATGACAACTTTG-3')
•Reverse GAPDH Primer, 10 µM (5'-GTCCACCACCCTGTTGCTGTAG-3')
•Water, nuclease free
参考文献
1.Schmidt, A., Su, Y.H., et al., UPS1 and UPS2 from Arabidopsis Mediate High Affinity Transport of Uracil and 5-Fluorouracil, The Journal of Biological Chemistry, vol. 279, 43, 44817-44824, 2004.
2.Papavinasasundaram, K.G., et al., Deletion of the Mycobacterium tuberculosis pknH Gene Confers a Higher Bacillary Load during the Chronic Phase of Infection in BALB/c Mice, Journal of Bacteriology, Aug., 5751-5760, 2005. |