说明
E. coli S30 Extract System for Linear Templates ( 用于线性DNA 模板的E. coli S30 提取物系统) 的制备采用并稍加改进了Lesley 及其同事描述的操作方法,用于对线性DNA 模板进行转录/ 翻译反应。研究者只需提供含有一个原核E. coli 样的启动子( 如lac UV5, tac , λ PL (con) 和
λ-PR) 的线性DNA 即可,DNA 模板还需有一个核糖体结合位点以直接在体外合成蛋白。在体外从DNA 模板合成的、缺少E. coli 启动子的RNA 也可以用于这个系统中,但比起从线性DNA 模板产生而来的蛋白质来说,产量会下降1-10%。
特点 . 灵活:可使用多种模板:DNA 片段、PCR 合成的DNA、连接后的寡聚核苷酸、体外生成的RNA 和原核RNA。
• 稳定性增加:减少了翻译蛋白被降解的可能性。
• 完备:包含了偶联的转录/ 翻译反应需要的所有组分。
• 低背景:系统合成的内源蛋白质水平极低。
• 已优化:每批的S30 提取物的预混合物已经经过优化,包括所有其它必需组分( 氨基酸除外),如核糖体,各种tRNA,PEP( 磷酸烯醇丙酮酸) 和盐类。
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