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产品简介： Cell Counting Kit-8 简称CCK-8试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验 使用说明： 一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时） 1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。 2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。 3、接种后培养至细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X 轴），OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。） 二、细胞活性检测 1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。 2、向每孔加入10μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。 3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 三、细胞增值-毒性检测 1、在96孔板中配置100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（在37 ℃，5% CO2的条件下）。 2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。 3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。 4、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。 6、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 活力计算：. 细胞活力（％）=[A(加药)－A(空白)]／[ A(0加药)－A(空白)]×100 A（加药）：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度 A（0 加药）：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力 注意事项： ①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。 ②白细胞可能需要培养较长时间。 ③当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1 ,000个/孔 (100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 ( 100 μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10% 加入CCK-8溶液。 ④如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片，但是450nm检测灵敏度最高。 ⑤培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。 CCK-8法与其它检测方法之间的比较： 细胞计数方法 MTT法 XTT 法 WST-1 法 CCK-8法 形成的formazan 的水溶性 差 好 好 好 产品性状 粉末 2 瓶溶液点击查看详细 |