Pichia pastoris HCP ELISA kit

产品英文名称：Pichia pastoris HCP ELISA kit
产品中文名称：毕赤酵母宿主细胞蛋白免疫检测试剂盒
Pichia pastoris HCP ELISA kit 产品介绍：
Pichia pastoris毕赤酵母基因表达系统经过十多年发展，成为较完善的外源基因酵母表达系统，具有易于高密度酵母发酵，欲表达基因可以稳定整合在宿主酵母基 因组中，能使产物有效分泌并适当糖基化，培养方便经济等特点。Pichia pastoris毕赤酵母基因表达系统利用强效可调控启动子AOX1，已高效表达了HBsAg、TNF、EGF、破伤风毒素C片段、基因工程抗体等多种外 源基因，证实Pichia pastoris毕赤酵母表达系统为高效、实用、简便 ，以提高表达量并保持产物生物学活性为突出特征的外源基因表达系统，而且非常适宜扩大为工业规模Pichia pastoris毕赤酵母发酵。
Pichia pastoris HCP ELISA试剂盒用于检测在毕赤酵母表达系统中重组表达的产物宿主细胞蛋白污染。最低检测浓度<0.3ng/mL。
检测原理：Pichia pastoris HCPs检测是一个双位点酶联免疫检测。样本中包含的Pichia pastoris HCPs蛋白与标记有抗- Pichia pastoris抗体的辣根过氧化物酶同时反应，反应发生在之前涂有一层吸附性抗- Pichia pastoris蛋白抗体的微量滴定板中进行。免疫反构成为夹层式结构：固相抗休-HCP-酶标记抗体。反应结束后清洗微量滴定板去除未结合反应物。添加 TMB作用底物反应。微量滴定板读数器上测定水解物浓度，水解物浓度与Pichia pastoris HCPs蛋白浓度成比例。用提供的标准液绘制标准曲线，根据读数可以计算出Pichia pastoris HCPs蛋白含量。
检测过程：标准检测：取出所有试剂平衡到室温→分别移取25µl标准液，对照物和样品至待测孔→移取100µl anti- Pichia pastoris:HRP(#F141)至每孔→密封滴定板，摇床室温温育3小时（快速检测时温育1小时），180rpm→清空小孔，用纸吸干残留液，350µl清洗缓冲液清洗4次→加100µl TMB 作用物(#F005)→室温静置30分钟，不需摇床→加100µl反应终止液(#F006)→分光光度计450/650nm读数
结果分析：标准液(0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL)可用于制作标准曲线，标准液浓度相当于免疫反应HCP总浓度。根据测定的小孔中标准液吸光值绘制标准曲线。数据分析可以使用计算机选配曲线，例如点到点，三次样本函数，或四参数逻辑曲线。不要使用线性回归分析修改样品吸光值，这样会出现显著误差。也可以手工绘图，Y轴标注吸光值，X轴标注浓度。然后根据样品吸光值计算出样品中HCP浓度。（操作时每一浓度标准液都要重复滴定到两个小孔中，以便计算平均分光光度值，样品也需计算平均吸光值）。
Pichia pastoris HCP ELISA kit产品组份：
● Anti- Pichia pastoris:HRP(辣根过氧化物酶标记)　         1x12mL   F141(Product#)
● Anti- Pichia pastoris coated微量滴定板　                      12x8孔　  F142
● Pichia pastoris HCP标准液(0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL)   1mL/瓶　 F143
● Stop Solution终止液(0.5M硫磺酸)  　　　                     1x12mL　 F006
● TMB (3,3’,5,5’-四甲基联苯氨)　                                     1x12mL　 F005
● Wash Concentrate清洗物(20倍浓缩)　                           1x50mL   F004

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