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如何应对Matrigel铺板过程中厚度不均一,产生气泡的情

发布人:浩然生物 浏览 7237次【字号 】 发布时间:2011年05月05日 打印本页

中国科技大学的刘熙秋教我们如何应对Matrigel铺板过程中厚度不均一,产生气泡的情况。
背景:Matrigel是一种可溶性的基底膜基质,可以有效帮助上皮细胞等各类细胞的附着和分化。在进行血管增生的研究中,经常需要将血管内皮细胞种在铺有Matrigel的细胞板上,观察经过不同的药物处理后,内皮细胞分化形成管状结构能力的变化。如果Matrigel包被的不好,出现厚度不均,有气泡产生的情况,则会对实验结果造成严重的干扰。
方法改进:
1、Matrigel从-80度保存状态解冻时一定要置于冰盒中,并将冰盒在4度冰箱放置过夜,这样可以使Matrigel解冻得更温和,胶质更均一。
2、在铺板过程中使用的细胞板、无菌枪头等最好也置于4度冰箱中过夜冷却充分,这样在操作过程中可以减缓Matrigel固化的时间,有利于均匀铺板。
3、在铺板过程中吸取Matrigel的量比预期的稍微多一点(比如24孔板里加入300μL Matrigel即可实现很好的铺板,吸取Matrigel的体积可以定在320μL左右),不要直接将Matrigel滴加到孔中央,而是顺时针方向沿着孔的周围转一圈滴加,注意不要将Matrigel完全从枪头中打出(这样就非常容易产生气泡而且气泡不易除去)而是留一些残留。滴加完毕后将细胞板先顺时针倾斜(左-上-右-下),然后按照十字形方向(左-右-上-下)倾斜,最后在室温条件下稳定15分钟。
结果:经过多次实验验证,Matrigel的铺板效果非常好,有效减少了对于后期实验的干扰。

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