miRNeasy FFPE Kit

miRNeasy FFPE Kit

从福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片中进行miRNA和总RNA的纯化

有效纯化miRNA和总RNA

创新方法用于克服福尔马林造成的交联

有效释放RNA而不会破坏其完整性

85分钟流畅的操作得到RNA

miRNeasy FFPE Kit确保从福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）的组织切片中纯化含约18个核苷酸以上的总RNA。试剂盒能够回收可用的RNA片段，包括miRNA和其他小RNA，用于定量real-time RT-PCR等下游应用。

性能

使用miRNeasy FFPE Kit纯化的总RNA和miRNA的产量和性能优于采用其他方法纯化的miRNA，如使用苯酚-氯仿抽提或者其他供应商的类似试剂盒（参见Effective real-time RT-PCR quantification、Efficient RNA purification from FFPE tissues和Superior yields and performance）。

原理

用福尔马林固定的组织导致RNA-RNA和RNA-蛋白质交联，从而影响了RNA在下游应用中的表现。miRNeasy FFPE Kit提供了独特的裂解和孵育条件，可逆转福尔马林对RNA造成的交联。特别研制的的裂解缓冲液有效地将RNA从组织切片中释放出来，同时避免了RNA的进一步降解。裂解产物用DNase消化，然后优化的结合条件能够纯化含约18个以上核苷酸的所有可用的RNA。

操作流程

所有的miRNeasy FFPE操作流程都可在85分钟之内完成。优化的裂解缓冲液能够用蛋白质酶K消化样本裂解产物，仅需15分钟而且不损耗RNA产量。裂解后，在80°C下孵育样本15分钟逆转福尔马林交联。然后，在优化的DNase消化步骤中，用DNase Booster Buffer快速去除基因组DNA，并且用RNeasy MinElute离心柱纯化浓缩的RNA（参见miRNeasy FFPE procedure）。由于RNA的洗脱体积仅有14–30 μl，在下游应用中可实现较小的反应体积。

应用

miRNeasy FFPE Kit能够纯化包含miRNA的总RNA，并且适用于多种下游应用，如定量real-time RT-PCR。